母猪乳汁中N-连接糖蛋白在哺乳过程中的表征

Prabha Rajput，Uma K Aryal，Ketaki Bhide，Radiah C Minor，Sairam Krishnamurthy，Theresa M Casey

乳蛋白作为营养物质，通过其生物活性影响新生儿发育和免疫。蛋白质的翻译后修饰影响其生物活性。糖基化是糖基与蛋白质的结合，其中糖基与天冬酰胺的结合称为N-连接糖基化。我们的目标是从不同时期（分娩时采集的初乳，泌乳3天时的过渡乳，泌乳14天的常乳）分别采集（n = 5/6）对应的均质乳汁进行N-连接糖基化蛋白质的表征。以凝集素为基础提取糖肽，用肽N-糖苷酶F （PNGase F）处理，鉴定N-连接糖基化位点。用无标签液相色谱-串联质谱（LC-MS /MS）分析纯化的糖肽。使用MaxQuant软件将光谱与Sus scrofa Uniport数据库进行比对，以识别蛋白质并测量其相对丰度。

方差分析和Welch 's t检验分析发现，初乳、过渡乳和常乳之间糖蛋白含量差异显著（错误发现率＜0.05）。Shotgun蛋白质组分析在母猪乳汁中的220个糖蛋白上鉴定出545个N-连接和谷氨酰胺，Q，-连接的糖基化位点（去酰胺化P＞0.75）。在猪乳汁生产的所有三个阶段都发现了糖蛋白，并因糖基化位点的数量（1-14个）以及初乳、过渡乳和常乳之间的丰度和分布而有所不同。多聚免疫球蛋白受体是糖化程度最高的蛋白，共鉴定出14个位点。酪蛋白和粘蛋白也高度糖基化。对这些数据进行了描述，并讨论了糖基化乳蛋白在新生儿发育中的相关性，如对病原体的保护。

2023，JAS，101：skac426

https://doi.org/10.1093/jas/skac426